トリプシンは、ペプチドのC末端のリジン残基とアルギニン残基を切断するセリンプロテアーゼです。
細胞培養において、培養容器表面から付着した細胞を剥がすために最も広く使用されている酵素です。
トリプシンは、培養で増殖するほとんどの種類の細胞に容易に耐性があります。
その活性は、培養液に血清を添加することで容易に中和することができます。
この2つの特徴により、トリプシンの細胞培養への利用が容易になります。
一般に、トリプシンはEDTAと共に細胞培養液に添加されます。
細胞培養におけるトリプシンの役割については、この記事で説明しています。
トリプシンとは
トリプシンは、多くの脊椎動物の消化器官において、タンパク質を分解する消化酵素です。
膵液に含まれる。
トリプシンは、ペプチドのカルボキシ末端のリジンとアルギニン残基を切断する。
しかし、この2つのアミノ酸の後にプラリネが続くと切断されない。
トリプシンの活性は多くのバイオテクノロジープロセスで利用されており、トリプシンの作用はトリプシン化またはトリプシン蛋白分解と呼ばれている。
トリプシンの結晶構造を図1に示す。
図1：トリプシン
トリプシンの作用に最適なpHは7.6-8.5です。
一般にトリプシンアッセイでは、上記のpH範囲をモニターするためにフェノールレッドが使用される。
フェノールレッドはこのpH領域でピンク色を呈します。
トリプシンアッセイはドライアイス上で行われます。
細胞培養におけるトリプシンの働きについて
細胞膜上のタンパク質は、細胞の正常な生理的活動を維持するために必要なさまざまな機能を担っている。
カドヘリンファミリーのようないくつかの細胞膜タンパク質は、細胞骨格タンパク質と細胞外マトリックスをつなぐアンカーとして機能する接着性タンパク質です。
これは、細胞接着や細胞移動を助ける。
図2に、細胞膜に存在する接着性タンパク質を示す。
図2: 細胞接着性タンパク質
細胞培養において、トリプシンを培地に添加することにより、接着タンパク質を消化して、培養容器表面から接着している細胞を剥がすことができる。
また、トリプシンは接着性タンパク質を消化することにより、細胞を凝集体から遊離させる。
EDTAは、培地中の二価イオンをキレートするために、トリプシンと共に細胞培養に添加される。
カルシウムとマグネシウムのイオンはトリプシンの作用を阻害することがあります。
最終的に、トリプシンは細胞培養物から個々の細胞を得るのに役立ち、下流での細胞の加工を容易にします。
結論
トリプシンは、ペプチドを消化する光分解酵素です。
トリプシンは接着タンパク質を消化して細胞を培地中に放出するため、個々の細胞を得るための細胞培養に広く用いられている。
