温熱トリプシン法と冷温トリプシン法の主な違いは、温熱トリプシン法は36.50℃の温熱トリプシンによる組織のインキュベーションであるのに対し、冷温トリプシン法は4℃の冷温トリプシンに組織を浸した後36.50℃のインキュベーションを行うということである。
さらに、温トリプシン法では細胞へのダメージが大きいのに対し、冷トリプシン法では温トリプシンによる組織への影響の長期化を抑えることができます。
温熱トリプシン法と冷温トリプシン法は、初代細胞培養に用いられる組織を酵素で分解する方法であるトリプシン化の2つの技術です。
ここで、トリプシンはタンパク質分解酵素であり、培養中の細胞を接着する役割を持つタンパク質を分解する。
温熱トリプシン化とは
温熱トリプシン法は、2種類のトリプシン法のうちの1つで、初代細胞培養の準備中に組織を酵素分解する際に使用されます。
36.50℃の温トリプシンを直接使用し、組織を分解する。
まず、切り刻んだ組織をDBSS（解剖用塩基性溶液）で洗浄し、温トリプシンを入れたフラスコに入れる。
解離した細胞は上澄み液にあり、30分おきにフラスコ内を攪拌して解離した細胞を回収する。
その後、新しいトリプシンを添加する。
そして、この操作を3〜4時間続け、解離した細胞を回収する。
最後に、遠心分離によって混合物からトリプシンを除去することができる。
さらに、温熱トリプシン法は、温熱トリプシンを直接使用するため、最も効果的な細胞採取方法です。
また、この方法は数時間で完了することができる。
しかし、温熱トリプシンによる悪影響のため、生細胞の収量は少なくなる。
コールドトリプシン化とは
コールドトリプシナリゼーションは、トリプシナリゼーションの第二の方法です。
効果は劣りますが、大量の生細胞が得られます。
コールドトリプシナリゼーションの欠点は、処置が完了するまでに時間がかかることです。
一般に、準備した組織はまず4℃で約6～24時間、コールドトリプシンに浸される。
次に、回収した組織を36.50℃で20～30分間、残留トリプシンと共にインキュベートする。
ピペッティングを繰り返すことで、解離した細胞を分散させることができます。
図2: 低温トリプシン法
しかし、前述の通り、この方法では温トリプシンへの長時間の曝露による細胞損傷のリスクはほとんどありません。
そのため、この方法では、培養中の細胞の生存率が向上します。
また、遠心分離が不要なため、通常の実験室での使用に適している。
しかし、この方法の大きな欠点は、一度に大量の組織には使用できないことである。
温間トリプシン化と冷間トリプシン化の類似性
- 温熱トリプシン法と冷温トリプシン法は、トリプシンを用いて細胞培養中の付着タンパク質を酵素的に分解するトリプシン化の2つの技術です。
- どちらの方法も、初代細胞培養のための組織を準備する際に使用することができます。
- さらに、どちらの方法も36.50℃の温トリプシンを使用することがあります。
- さらに、これらの方法は、細胞の分離に役立ちます。
温トリプシン化と冷トリプシン化の違い
定義
温熱トリプシン法とは、トリプシンと共に36.50℃でインキュベートした後、遠心分離によりトリプシンを除去する方法であり、冷熱トリプシン法とは、トリプシンと共に4℃でソークし、その後トリプシンと共に36.50℃でインキュベートする方法のことである。
これが温熱トリプシン法と冷温トリプシン法の大きな違いです。
温熱トリプシン（36.50 ℃）の使用法
温熱トリプシンと冷温トリプシンのもう一つの大きな違いは、温熱トリプシンでは組織を3～4時間処理するのに対し、温熱トリプシンでは20～30分インキュベートすることである。
遠心分離
遠心分離も温熱トリプシナイズと冷熱トリプシナイズの違いの一つです。
温熱トリプシン法では、試料からトリプシンを除去するために遠心分離が必須であるが、冷温トリプシン法では遠心分離は必要ない。
効果
また、温熱トリプシン化では効果が高く、冷熱トリプシン化では効果が低い。
重要性
温熱トリプシン法と冷温トリプシン法の違いは、その重要性に加え、もう一つある。
温熱トリプシン法では組織内の細胞にダメージを与える可能性がありますが、冷温トリプシン法では温熱トリプシン法の悪影響は取り除かれています。
生細胞の収量
生細胞の収量も温熱トリプシン法と冷温トリプシン法の違いの一つです。
温熱トリプシン法では生細胞の収量が少なく、冷温トリプシン法では生細胞の収量が多くなります。
時間
さらに、温熱トリプシン法はより短時間で終了し、冷熱トリプシン法はより多くの時間を必要とする。
アプリケーション
また、細胞外マトリックスや繊維性結合組織を含む組織には温熱トリプシン法が、胚性臓器などの軟組織には冷温トリプシン法が使用されます。
結論
温熱トリプシン法は、36.50 ℃の温熱トリプシンを用いて組織を処理し、付着タンパク質を分解するトリプシン化法です。
組織の酵素分解には有効な方法であるが、温トリプシンによる悪影響のため、生細胞の収量が少なくなる。
これに対し、コールドトリプシネーションはトリプシン化の第二の方法であり、ウォームトリプシンとのインキュベーションの前に、コールドトリプシンに組織を4℃で浸漬させる。
この方法は効果は劣るが、多くの生細胞を得ることができる。
したがって、温熱トリプシンと冷温トリプシンの主な違いは、温熱トリプシンの使用方法とそれぞれの方法の重要性です。
