免疫沈降法とウェスタンブロットの主な違いは、免疫沈降法が抗体とアガロースビーズを用いて溶液から目的タンパク質を分離するのに対し、ウェスタンブロットはゲル電気泳動と抗体プローブを使ってタンパク質を分析することである。
免疫沈降法とウェスタンブロット法は、タンパク質解析の2つの技術です。
免疫沈降法は放射性物質で標識し、ウェスタンブロット法は抗体で可視化し、分離したタンパク質を分析する。
免疫沈降法とは？
免疫沈降法は、標的タンパク質に特異的に結合する抗体を用いて、溶液中のタンパク質を沈殿させる技術です。
何千種類ものタンパク質の中から、溶液中からタンパク質を分離・濃縮することが重要です。
しかも、その抗体は固体基材に結合している。
しかし、個別タンパク質の免疫沈降、タンパク質複合体の免疫沈降、クロマチン免疫沈降、リボ核タンパク質の免疫沈降、タグタンパク質の免疫沈降において重要な技術です。
図1: クロマチン免疫沈降法
さらに、免疫沈降法には、直接法、間接法、選択法の3つがあります。
直接法では、標的タンパク質に特異的な抗体を用いて、固体表面に固定化する。
間接的免疫沈降法は、タンパク質群に特異的な抗体を用いて固定化する方法です。
また、溶液中の目的タンパク質の濃度が低い場合には、選択法が重要です。
ウェスタンブロットとは
ウェスタンブロットまたはイムノブロットとは、溶液中のタンパク質をサイズと特異性によって検出する技術です。
この方法では、タンパク質を分離するために、サイズによる分離、固体支持体へのタンパク質の移動、一次抗体と二次抗体を用いた標的タンパク質の可視化という3つの作業が行われます。
図2: ウェスタンブロット
まず、一次抗体が標的タンパク質に結合する。
次に、二次抗体が一次抗体に結合する。
次に、二次抗体が結合します。
最後に、染色、免疫蛍光、放射能のいずれかで検出する。
ただし、溶液中のタンパク質は、抗体の検出と特異的結合の前に、ゲル電気泳動によってサイズ別に分画される。
免疫沈降法とウェスタンブロットの類似点
- 免疫沈降法とウェスタンブロット法は、溶液からタンパク質を分離する技術です。
- また、両者とも標的タンパク質に特異的な抗体を使用します。
免疫沈降法とウェスタンブロットの違いについて
定義
免疫沈降法とは、特定のタンパク質に特異的に結合する抗体を用いて、溶液中のタンパク質抗原を沈殿させる技術であり、ウェスタンブロットとは、分子生物学や免疫遺伝学の分野で広く用いられている、組織のホモジネートや抽出液のサンプル中の特定のタンパク質を検出する分析技術です。
重要性
通常、免疫沈降法は抗体とアガロースビーズを用いて溶液から目的タンパク質を分離し、ウェスタンブロットはゲル電気泳動と抗体プローブを用いてタンパク質のサイズと量を分析する。
タンパク質のコンフォメーション
免疫沈降法はタンパク質のネイティブな構造を、ウェスタンブロット法はタンパク質の変性した状態を分析する。
濃縮度
また、免疫沈降法は高濃度のタンパク質を必要とし、ウェスタンブロッティングは溶液中のタンパク質濃度が低くても適用可能です。
識別番号
ただし、免疫沈降は放射性標識、ウェスタンブロットは酵素を結合させた抗体を使用する。
結論
簡単に説明すると、溶液からタンパク質を分離する技術として、免疫沈降法とウェスタンブロット法があります。
免疫沈降法は溶液から目的のタンパク質を沈殿させ、ウェスタンブロット法は溶液中のタンパク質をサイズ別に分画する。
しかし、両者とも抗体を用いて検出する方法はほとんど同じです。
したがって、免疫沈降法とウェスタンブロットの大きな違いは、その機能です。
